流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)中有著廣泛的應(yīng)用，其免疫熒光染色的標(biāo)本制備非常重要，常常由于標(biāo)本的制備過程中出現(xiàn)人為非特異性熒光干擾（尤其在間接免疫熒光染色中）或細(xì)胞濃度低等檢測結(jié)果。解決這些影響因素的方法如下。

（1）確保標(biāo)本上機(jī)檢測前的濃度為1×10⁶/ml，細(xì)胞濃度過低直接影響檢測結(jié)果。

（2）使用蛋白封閉劑，封閉非特異結(jié)合點(diǎn)，尤其在間接免疫熒光標(biāo)記時必不可少。常用的蛋白封閉劑為0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。

（3）熒光抗體染色后充分洗滌，注意混勻和離心速度，減少重疊細(xì)胞和細(xì)胞碎片。 

（4）設(shè)置對照樣品，采用與抗體來源同型匹配的無關(guān)對照和熒光抗體的本底對照。

（5）判定結(jié)果時，應(yīng)注意減去本底熒光，為使免疫熒光的定量分析更準(zhǔn)確，應(yīng)用計(jì)算機(jī)程序軟件，用擬合曲線方法從實(shí)驗(yàn)組的，曲線峰值中減去對照組的，曲線峰值，可以得到更準(zhǔn)確的免疫熒光定量結(jié)果。

（6）注意在冷環(huán)境下操作染色，或加入疊氮鈉，保證細(xì)胞免疫熒光定量分析精確和穩(wěn)定。

（7）標(biāo)本保存，免疫熒光染色后，標(biāo)本不固定可以在4攝氏度避光情況下保存24小時。時間更長則需要固定保存，常用的固定劑為1%-4%多聚甲醛緩沖液或4%甲醛緩沖液（pH 7.2），固定時間可達(dá)到2—3周。

（責(zé)任編輯：liushengbao）

共2頁,當(dāng)前第1頁  第一頁  前一頁  下一頁