第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法

《中國藥典》在附錄中收載了一般雜質(zhì)的檢查方法。一般雜質(zhì)的檢查幾乎都用對照品比較法

1. 氯化物檢查法 檢查藥物中的Cl- 比濁度法

(1)原理

Cl- + Ag+ = AgCl ↓

(2)所用試劑：稀硝酸、硝酸銀試液、標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液

加稀硝酸的作用：

①避免弱酸銀鹽如碳酸銀、磷酸銀以及氧化銀沉淀的形成而干擾檢查;

②加速AgCl沉淀的生成并產(chǎn)生較好的乳濁。

為了避免光線使單質(zhì)銀析出，在觀察前應(yīng)在暗處放置5分鐘。由于氯化銀是白色沉淀，比較適應(yīng)將比色管置于黑色背景下，從上方向下觀察，可以增加液層厚度。

2. 硫酸鹽檢查法：檢查藥物中的SO42- 比濁度法

(白色沉淀，需在黑色背景上觀察)

加稀鹽酸目的：防止碳酸鋇或磷酸鋇等沉淀生成。使溶液的pH約為1為宜，若酸度過高，可使硫酸鋇溶解度增大，靈敏度下降。

例，檢查硫酸鹽時加入氯化鋇的溶液濃度為

A 10% B 15% C 20% D 25% E 30%

3. 鐵鹽檢查法( Fe3+; Fe2+ ) 屬于比色法

《中國藥典》采用硫氰酸鹽法(SCN-)檢查鐵鹽

Fe3+ + 6SCN- [Fe{SCN}6]3-紅色

(1)硫氰酸鹽(銨)作用：顯色劑，與Fe3+生成紅色[Fe(SCN)6]3-。

(2)稀鹽酸的作用：防止Fe3+水解。

(3)過硫酸銨[ (NH4)2S2O8]的作用：為氧化劑，氧化Fe2+成Fe3+。

(4)需加入過量的硫氰酸銨溶液 原因：Fe3+與SCN-的顯色反應(yīng)為可逆反應(yīng)

4. 重金屬檢查法

定義：在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉(S2-)作用顯色的金屬雜質(zhì)，以鉛為代表。

中國藥典(2010年版)收載有三種方法：

第一法：硫代乙酰胺法; 第二法：熾灼后的硫代乙酰胺法

第三法：硫化鈉法;

(1) 重金屬檢查第一法：即硫代乙酰胺法，適用于溶于水、稀酸或乙醇的藥物，是最常用的方法 比色法

H2S + Pb2+ → PbS↓

在pH 3 ~ 3.5時，硫化鉛的沉淀較完全。采用醋酸鹽緩沖液(pH 3.5)維持酸度。若酸度過大，重金屬離子與硫化氫呈色變淺，酸度太大甚至不顯色。

(2)第二法 將供試品熾灼破壞后檢查或取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)M(jìn)行檢查的方法。

①適于：難溶于水或乙醇、能與重金屬離子形成穩(wěn)定配位化合物而干擾檢查的有機(jī)藥物

②原理：熾灼除去藥物干擾，殘?jiān)?jīng)處理后同第一法檢查，比色法。

③熾灼破壞藥物的溫度為：500 ~ 600 ℃。

(3)第三法 硫化鈉法

磺胺類、巴比妥類藥物難溶于稀酸，但溶于堿性水溶液， 按第三法檢查重金屬。原理：在氫氧化鈉溶液中，硫化鈉與重金屬離子反應(yīng)而呈色。比色法。

例，藥物中的重金屬雜質(zhì)是指

A 在實(shí)驗(yàn)條件下耐高溫的金屬 B 在實(shí)驗(yàn)條件下能使蛋白質(zhì)變性的金屬

C 在實(shí)驗(yàn)條件下能與金屬配位劑反應(yīng)的金屬 D 在實(shí)驗(yàn)條件下比重大于5的金屬

E 在實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬

5. 砷鹽檢查法(限量檢查法)

《中國藥典》采用 ①古蔡氏法 ②二乙基二硫代氨基甲酸銀法Ag-DDC法

①古蔡法：金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，氫與藥物中微量砷鹽反應(yīng)，生成砷化氫氣體，遇溴化汞試紙產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液同法所得砷斑比較，來判斷砷鹽含量

所用試劑：金屬鋅、鹽酸、KI試液、酸性氯化亞錫(SnCl2)試液、溴化汞試紙、醋酸鉛棉花

應(yīng)注意：

金屬鋅粒2 g與鹽酸的作用：生成新生態(tài)的氫(活潑性氫)

加KI和酸性SnCl2試液：將五價砷還原為三價砷，可加快砷鹽被新生態(tài)氫還原為砷化氫的反應(yīng)速度。

溴化汞試紙的作用：與砷化氫形成呈色的砷斑。

加醋酸鉛棉花：吸收H2S，消除鋅?；蚬┰嚻分泻械牧蚧锼a(chǎn)生硫化氫氣體的干擾。

最佳條件：標(biāo)準(zhǔn)砷斑用2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液(相當(dāng)于2g As)制備。

② 二乙基二硫代氨基甲酸銀法(Ag - DDC法)

原理：產(chǎn)生砷化氫以前和古蔡氏法一樣。

砷化氫與Ag - DDC吡啶溶液作用，使Ag -DDC中的銀還原為紅色膠態(tài)銀。

6. 干燥失重測定法：主要檢查藥物中的水份，也包括其他揮發(fā)性物質(zhì)如殘留有機(jī)溶劑等。

(1)常壓恒溫干燥法：一般105℃。 如含有結(jié)晶水，硫酸奎尼丁，要求在120°干燥至恒重。

干燥至 “恒重”的第二次及以后各次稱重間隔為1h。

(2)常壓室溫干燥法

放入有干燥劑的干燥器內(nèi)，吸收供試品水分。

適用于受熱易分解的藥物：氯化銨、苯佐卡因、硝酸異山梨酯、馬來酸麥角新堿

常用干燥劑：硅膠、濃硫酸、五氧化二磷

(3)減壓恒溫干燥法：適用于熔點(diǎn)低，受熱不穩(wěn)定但能耐受一定溫度或水分難趕除的藥物。腎上腺素、地高辛

(4)減壓室溫干燥法：適用于熔點(diǎn)低，或不能加熱的樣品，如布洛芬，前列地爾

(5)熱重分析法 (TGA)

熱重法是在程序控制溫度下，測量物質(zhì)質(zhì)量與溫度關(guān)系的一種技術(shù)。

適用于結(jié)晶水的測定、貴重藥物或空氣中易氧化藥物干燥失重的測定。

7. 熾灼殘?jiān)鼨z查法：檢查有機(jī)物中混入的各種無機(jī)雜質(zhì)(如金屬的氧化物或鹽等)

屬于直接揮發(fā)重量法。

樣品炭化后 + H2SO4濕潤 →700～800℃熾灼至恒重→稱重

若熾灼殘?jiān)枇糇髦亟饘贆z查時，則改在500～600℃熾灼至恒重

8. 易炭化物檢查法

檢查藥物中遇硫酸易炭化或易被氧化而呈色的微量有機(jī)雜質(zhì)。

方法： H2SO4炭化后與標(biāo)準(zhǔn)比色液比較(或與對照液比較法)

9. 殘留溶劑測定法

定義：藥物中的殘留溶劑是指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過程中使用的，但在工藝過程中未能完全除去的有機(jī)溶劑。

(一)分類

根據(jù)有機(jī)溶劑的毒性，國際統(tǒng)一將殘留溶劑分四類

第一類溶劑為應(yīng)該避免使用的溶劑，一般為致癌物或危害環(huán)境的物質(zhì)，共有5種：

苯、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、 1,1-二氯乙烯、 1,1,1-三氯乙烷。

第二類溶劑：應(yīng)限制使用的溶劑，一般具有非基因毒性，不可逆或可逆毒性。共有27種 ，常見的有：甲苯、甲醇、三氯甲烷、二氯甲烷、正己烷、乙腈。

第三類溶劑：毒性低，對人體危害較小的溶劑

常見的有：丙酮、乙醇、乙醚、乙酸乙酯

第四類溶劑：目前尚無足夠毒理學(xué)資料的溶劑

常見的有：石油醚、異丙醚

(二)溶劑殘留量測定方法 各國藥典均采用氣相色譜法檢查殘留溶劑。

進(jìn)樣方法：頂空進(jìn)樣、溶液直接進(jìn)樣

檢測器：一般使用氫火焰離子化檢測器，對于鹵代的溶劑如三氯甲烷，也可以使用電子捕獲檢測器。

10. 溶液顏色檢查法：控制藥物中有色雜質(zhì)含量方法，采用三種方法檢查

第一法：與標(biāo)準(zhǔn)比色液比較法

第二法：可見分光光度法

第三法：色差計(jì)法：當(dāng)目視法不易比較時，可采用該法比較

11. 澄清度檢查法 比濁度法

檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)，注射劑的原料藥應(yīng)作此項(xiàng)檢查。

第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查

知識點(diǎn)一、雜質(zhì)檢查項(xiàng)目與限度

1.確定藥品中雜質(zhì)檢查項(xiàng)目的原則

①對于表觀含量在0.1%及以上的雜質(zhì)及表觀含量在0.1%以下的具強(qiáng)烈生物作用的雜質(zhì)或毒性雜質(zhì)，應(yīng)予定性或確證其結(jié)構(gòu)。

②共存的異構(gòu)體和抗生素組分一般不作為雜質(zhì)檢查項(xiàng)目，作為共存物質(zhì)。

③殘留溶劑，根據(jù)生產(chǎn)工藝中所用的有機(jī)溶劑及殘留情況，確定檢查項(xiàng)目。

2.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)限度的制定

新藥的雜質(zhì)限量是在一系列的藥理毒理及臨床研究來驗(yàn)證該藥品的安全有效性基礎(chǔ)上進(jìn)行的。

二、雜質(zhì)檢查方法

有機(jī)雜質(zhì)檢測一般多采用HPLC、有時也多用TLC、GC等其他方法。

特定雜質(zhì)中的未知雜質(zhì)的定量可用主成分自身對照法進(jìn)行計(jì)算。

習(xí)題：

(單選)1.熱重分析法是測量

A 物質(zhì)的質(zhì)量與溫度關(guān)系的方法

B 物質(zhì)的熔點(diǎn)與溫度關(guān)系的方法

C 物質(zhì)的旋光度與溫度關(guān)系的方法

D 物質(zhì)的質(zhì)量與時間關(guān)系的方法

E 物質(zhì)的熔點(diǎn)與時間關(guān)系的方法

2.藥物殘留溶劑測定法中，按國際統(tǒng)一劃分，苯屬于

A 第一類溶劑 B 第二類溶劑 C 第三類溶劑

D 第四類溶劑 E 第零類溶劑

(多選)3.重金屬檢查常用的顯色劑是

A 硫酸鈉 B 亞硫酸鈉 C 硫化鈉

D硫化銨 E硫代乙酰胺

(B型題)

A 不溶性雜質(zhì) B 遇硫酸易炭化的雜質(zhì)

C 水分及其他揮發(fā)性雜質(zhì) D 有色雜質(zhì)

E 硫酸鹽雜質(zhì)

以下檢查的雜質(zhì)是

4.易炭化雜質(zhì)檢查法

5.干燥失重測定法

6.澄清度檢查法

7.溶液顏色檢查法

(X型題)8.雜質(zhì)限量常用的表示方法有

A mg B ng C mol/L D 百萬分之幾 E 百分之幾

答案： A A CE BCAD DE

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