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本法系比較肝素標(biāo)準(zhǔn)品(S)與供試品(T)延長新鮮兔血或兔、豬血漿凝結(jié)時(shí)間的作用，以測定供試品的效價(jià)。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

精密稱取肝素標(biāo)準(zhǔn)品適量，按標(biāo)示效價(jià)加滅菌水溶解使成每1ml中含100單位的溶液，分裝于適宜的容器內(nèi)，4～8℃貯存，如無沉淀析出，可在3個月內(nèi)使用。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的配制

試驗(yàn)當(dāng)日，精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按高、中、低劑量組(ds<[3]>、ds<[2]>、ds<[1]>)用 0.9%氯化鈉溶液配成三種濃度的稀釋液，相鄰兩濃度的比值(r)應(yīng)相等。調(diào)節(jié)劑量使低劑量組各管的平均凝結(jié)時(shí)間較不加肝素對照管組明顯延長。高劑量組各管的平均凝結(jié)時(shí)間，用新鮮兔血者，以不超過60分鐘為宜，其稀釋液一般可配成每1ml中含肝素2～5單位，r為1：0.7左右;用血漿者，以不超過30分鐘為宜，其稀釋液一般可配成每1ml中含肝素0.5～1.5單位，r為1∶0.85左右。

供試品溶液與稀釋液的配制

按供試品的標(biāo)示量或估計(jì)效價(jià)(A<[T]>)，照標(biāo)準(zhǔn)品溶液與稀釋液的配制法配成高、中、低(dT<[3]>、dT<[2]>、 dT<[1]>)三種濃度的稀釋液。相鄰兩濃度之比值(r)應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品相等，供試品與標(biāo)準(zhǔn)品各劑量組的凝結(jié)時(shí)間應(yīng)相近。

血漿的制備

迅速收集兔或豬血置預(yù)先放有8%枸櫞酸鈉溶液的容器中，枸櫞酸鈉溶液與血液容積之比為1：19，邊收集邊輕輕振搖，混勻，迅速離心約20分鐘(離心力不超過1500×g為宜，g為重力常數(shù))。立即分出血漿，分成若干份分裝于適宜容器內(nèi)，低溫凍結(jié)貯存。臨用時(shí)置37±0.5℃水浴中融化，用兩層紗布或快速濾紙過濾，使用過程中在4～8℃放置。

檢定法

(1)新鮮兔血

取管徑均勻(0.8×3.8cm或1.0×7.5cm)、清潔干燥的小試管若干支，每管加入一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或供試品稀釋液0.1ml，每種濃度不得少于3管，各濃度的試管支數(shù)相等。取剛抽出的兔血適量，分別注入小試管內(nèi)，每管0.9ml，立即混勻，避免產(chǎn)生氣泡，并開始計(jì)算時(shí)間。將小試管置37±0.5℃恒溫水浴中，從動物采血時(shí)起至小試管放入恒溫水浴的時(shí)間不得超過 3分鐘，注意觀察并記錄各管的凝結(jié)時(shí)間。

(2)血漿

取上述規(guī)格的小試管若干支，分別加入血漿一定量，置37±0.5℃恒溫水浴中預(yù)熱5～10分鐘后，依次每管加入一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或供試品稀釋液及1%氯化鈣溶液(每種濃度不得少于3管，各濃度的試管支數(shù)相等)，血漿、肝素稀釋液和氯化鈣溶液的加入量分別為0.5、0.4和0.1ml(或0.8、0.1和0.1ml)，加入氯化鈣溶液后，立即混勻，避免產(chǎn)生氣泡，并開始計(jì)算時(shí)間，注意觀察并記錄各管凝結(jié)時(shí)間。將各管凝結(jié)時(shí)間換算成對數(shù)，照生物檢定統(tǒng)計(jì)法(附錄ⅩⅣ)中的量反應(yīng)平行線測定法計(jì)算效價(jià)及實(shí)驗(yàn)誤差。

檢定法(1)的可信限率(FL%)不得大于10%。

檢定法(2)的可信限率(FL%)不得大于5%。

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